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一 准备工作

1. 精确称取1 g 酶粉，用蒸馏水定容到200ml，配制5g/L的稀释酶液。
2. 准备好新华1号滤纸条，规格：1cm Χ 6cm。
3. 配备pH = 4.8的醋酸缓冲溶液。
4. 按照下表配备3，5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）：

二 标准葡萄糖曲线绘制（吸光度值与葡萄糖含量线性回归）

按下表1-1各取1 mg/ml标准葡萄糖液、3，5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）：

表1-1

在沸水浴中反应15 min，冷却后定容到25 ml，在λ_max = 550nm下，用分光光度计测量吸光度值，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖量为横坐标，绘制标准曲线。或用Excel进行相应的线性回归。

三滤纸酶活力测定

1. 将新华1号滤纸一条放入有标准刻度的试管中。
2. 精确加入1.8 ml pH = 4.8醋酸缓冲溶液。
3. 精确加入5g/L的稀释酶液0.2 ml，摇匀。
4. 在50±1℃水浴中保温反应60min。
5. 保温反应结束，精确加入3ml DNS试剂。
6. 放入沸水浴中反应15min（注意：将8空白对照液同浴反应）。
7. 冷却后加入蒸馏水定容到25ml。
8. 空白对照液的配制：

(1)精确加入0.2ml稀释酶液。

(2)精确加入1.8 ml pH = 4.8醋酸缓冲溶液。

(3)放入新华1号滤纸一条。

(4)精确加入3ml DNS试剂。

(5)随同对照样，放入沸水浴中反应15min(注意：参见操作步骤6)。

(6)冷却后加入蒸馏水定容到25ml。

9．以空白对照液调零点，在λ_max = 550nm下，用分光光度计测量吸光度值。

滤纸酶活力 = A × 5 × 200 × 1000 / 60 （u/g）

A 吸光度值在标准曲线上对应的葡萄糖量（mg）。

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CMC酶（Cx）活力测定方法

1. 用pH = 4.8醋酸缓冲溶液配制1%CMC溶液。
2. 准确称取1g酶粉，用蒸馏水定容到2000ml，配制0.5g/L的稀释酶溶液。
3. 在有标准刻度线的试管中加入1.8ml1%CMC溶液。
4. 再加入0.2ml稀释酶液。
5. 在50±1℃水浴中保温反应30min后，立即加入3ml DNS试剂。
6. 空白对照液用1.8ml1%CMC溶液加入3ml DNS试剂，再加入0.2ml稀释酶液。
7. 同时在沸水浴中反应10min，加入蒸馏水定容到25ml。
8. 以空白对照液调零点，在λ_max = 550nm下，用分光光度计测量吸光度值。

          Cx酶活力 = A × 5 × 2000 × 1000 / 30（u/g）